NY_T 1185-2006 马流行性感冒诊断技术
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ID： |
18B74A3004524487B27164460095FBBC |
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文件大小(MB)： |
0.49 |
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页数： |
10 |
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日期： |
2024-8-13 |
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ICS 11.220,B 41,中华人民共和国农业行业标准,NY/T 1185—2006,马流行性感冒诊断技术,Diagnostic techniques for equine influenza,2006-0770 发布2006-10-01 实施,翻中华人民共和国农业部,发布,NY/T 1185—2006,刖 B,马流行性感冒（Equine Influenza）是由正黏病毒科流感病毒属A型流感病毒（亚型LH7N7,亚型2：,H3N8）引起马的ー种急性呼吸道传染病,临床表现为高热、有刺耳的干咳,鼻孔有黏性脓性分泌物.最,典型的特点是在易感马群中传播极快,发病率极高,有时可高达100%ロ本病无年龄、性别、品种差异0,一年四季均可发生口对未受母源抗体保护的幼驹较多地发生致死性感染口病马退热后较长时间带毒和,排毒,成为威胁马属动物的传染源口,我国将该病定为二类动物疫病.本标准病毒抗原的ELISA检测方法等同采用OIE《哺乳动物、禽、,蜜蜂A和B类疾病诊断试验和疫苗标准手册》（2000版）推荐的方法,其他诊断方法等效采用OIE推荐,的方法,本标准的附录A、附录B、附录C和附录D为规范性附录0,本标准由中华人民共和国农业部提出口,本标准由全国动物防疫标准化技术委员会归ロ 〇,本标准起草单位:农业部动物检疫所、中国农业科学院哈尔滨兽医研究所口,本标准主要起草人:王玉东、相文华、郑增忍、杨建德、刘俊辉、曲志娜、王永玲口,I,NY/T 1185—2006,马流行性感冒诊断技术,1范E,本标准规定了马流行性感冒的临床诊断、病原分离、血凝试验(HA)、病毒抗原的ELISA试验、血凝,抑制试验(Hl)的技术要求Q,本标准适用于马流行性感冒的流行病学调查、临床诊断和实验室诊断O,2临床诊断,2.I询问易感马发病状况及免疫情况,当出现发热、刺耳的干咳、鼻流黏性脓性分泌物时,怀疑发生本,病む,2,2轻症型:此种病型常见,主要表现轻度咳嗽,流水样或浆液性鼻汁,体温稍升高或正常,眼结膜潮,红ナ一般约经ー周后康复Q,2.3 重症型:患马突然发病,表现精神委顿、食欲减退、全身无カ、不愿活动口体温升高至39.5じ,稽留,3 d~4d,发热的同时出现阵发性咳嗽，初为干咳,后为湿咳,有冷空气或尘埃刺激时会出现剧烈咳嗽口,初期流浆液性或黏液性鼻汁,后期为黄白色脓性鼻汁口鼻黏膜潮红、眼结膜充血肿胀,流泪,分泌物增,多口呼吸加快、有的出现心率不齐,四肢下端或腹下发生浮肿ロ多为良性经过,约经ー周后恢复正常口,2.4 在临床诊断不能确诊或必须进行确诊试验时,要进行实验室诊断口,3实验室诊断,3.1病原鉴定,3.1 J材料准备,3.1.1.1器材:酶标仪、96孔V型或U型微量反应板、微量移液器、恒温培养箱、孵化器、恒温水浴锅、,普通冰箱、低温冰柜、台式离心机、1 mし注射器和5 mし注射器、棉拭子、青霉素瓶等口,3,U.2试剂:甘油、乙酸、过碘酸钾(KIO4)、青霉素、链霉素、丁胺卡那霉素,0-1 mol/L pH为7.2的磷酸盐缓冲液(PBS),配制方法见附录Ao,1 %鸡红细胞悬液:配制方法见附录Bo,马流感抗原(全病毒或吐温80/乙醛处理过的病毒):病毒处理方法见附录Do,马流感标准亚型阳性血清、标准阴性血清Q,3.1J.3 10日龄.11日龄SPF鸡胚,3.1-2病原分离,3.L2」样品采集,应在临床症状出现后立即采集样品,包括鼻咽拭子和气管冲洗物Q取样时须将棉拭子经前侧鼻道,伸入鼻咽部并停留10 s,蘸取呼吸道黏液,取出后立即放入盛有1 mL~2mし运输培养液的青霉素瓶中,该运输培养液是含有40%甘油的pH为7.2的0」mol/L磷酸盐缓冲液(PBS)口样品在4む时可保存,ld~2d,若要保存较长时间,则应在ー60匕以下温度保存,运送样品时应该加冰块冷藏Q,3.1.2.2样品处理,一次只能处理一份样品,从鼻咽拭子中挤出的液体,加入青霉素1 000 IU/mL-2 000 IU/mL,链霉,素lmg/mL~2mg/mL0如果样品污染严重,应加丁胺卡那霉素等敏感抗生素,加2 000 IU/thLq加完,抗生素后,放在冰上静置30 mi丒然后以1 500 r/min离心!5 miロ,上清液经0.22円n微孔滤膜过滤.去,1,NY/T 1185—2006,除细菌和杂质,经检测无菌后,滤液用于SPF鸡胚接种口未用完的样品放回ー60む以下冰箱保存口,3.1- 2,3样品接种,孵化至10日龄~11日龄的SPF鸡胚将气室部用碘酊和酒精消毒后,在壳上打ー个孔口每份样品,接种3枚鸡胚,每胚尿囊腔内接种52 mLo用石蜡封孔,鸡胚放置34匕~35む孵化器内继续孵化3孔,3.1,2,4收获尿囊液,将鸡胚转到4匕冰箱中放置4h或过夜,使鸡胚死亡,使在收获时减少出血口先将蛋壳表面消毒,用,注射器收获尿囊液,用1%的红细胞悬液检测尿囊液的血凝活性（HA）0每胚收获的尿囊液要分开冷冻,保存,3.1.2.5种毒选择与保存,为避免缺陷型病毒粒子产生干扰,要将接种物先作10倍、100倍」 〇〇〇倍稀释再接种,选择最高稀,释度HA呈阳性的样品培养物作为种毒,保存在ー70む以下的冰箱中心,3.1.3血凝试验（HA）,3.L3.1在反应板ー排各孔中加25ML PBSo,3J.3.2第一孔中加25朴L病毒抗原（尿囊液病毒抗原的处理方法,见附录D）,按1：2倍比稀释,最后,一孔不加抗原作阴性对照Q,3.L3.3每孔中再加25^L PBSロ,3J3.4每孔加50ル1%红细胞液,22匕（±2匕）作用30 min,3J.3.5结果判定:当红细胞被凝集时，红细胞均匀分布在……
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